PCR仪原理？

一、PCR仪原理？

PCR技术的原理是依赖于与靶序列的寡核苷酸引物。PCR技术其实是一种体外的DNA产生扩增的技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将需要被扩增的DNA的片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经过一系列反应的多次循环，从而就可以在较短的时间内获得我们所需的特定的基因片段。

二、什么是PCR？PCR仪的分类？

PCR仪分为：FLAT PCR仪、梯度PCR仪、多通道荧光定量PCR仪、普通PCR仪，分类是五花八门的，主要还是看你需要，要了解详细找技术人员，如康高特

三、PCR仪怎么工作？

PCR仪的 基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

       1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

       2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

       3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链"，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

四、pcr仪怎么预热？

先加模板DNA，再加入冰上预冷的Buffer、MgCl2、dNTP和ddH2O，接着将正反引物加到pcr管壁上（不使引物沉到管底），打开PCR仪，预热到80度

五、PCR仪的功能？

用我自己的话说，就是pcr扩增仪是普通的pcr反应，反应后产物一般通过电泳查看结果。实时荧光pcr即real-timepcr，是在反应体系中加入目的基因的探针，pcr过程中，根据目标基因的表达量多少，探针可发荧光，rt-pcr仪通过检测荧光表达量来记录基因表达量，从而达到了同不定量检测基因表达量，不需要电泳辅助。

如果一步pcr反应即可达到目标就直接用实时荧光pcr即可快速检测，如果你的pcr反应需要两步（如巢式pcr），第一步可以用普通pcr扩增仪，当然第一步也可以用实时荧光pcr，不放探针就行了，你不觉得这有点奢侈吗......

价格，那得看哪产的了......一部进口的普通pcr可以比国产的rt-pcr贵很多。仪器也需要休息，我学校的一台普通扩增仪几乎一天用20个小时，到最后每天都会出问题，你舍得用进口的rt-pcr干这个嘛？pcr一页可以说一分钱一分货，举一个例子，进口的pcr有的可以将温度精确到0.1度，而且变温速度也很重要，关键是看你做的实验是否需要这么精确，是否需要进口高端级别的pcr

六、pcr仪怎么关闭？

pcr仪有电源开关的，pcr结束后拿出产物，就可以直接关闭电源开关。

七、PCR仪如何设置？

1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。

2、放 PCR 离心管，先把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR 管

放入前应加好反应体系各组分，再放入 PCR 离心管。

3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。

4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。

5、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要

的温度、时间、循环数等。

6、据 PCR 离心管中加入的反应体积总量，在“Reaction volume”后输入

相应数值，有 Std“1～100ul”和 9600“1~50ul”两档可供选择。

7、按 F1“Start”启动

8、按“INFO”对应键查看 PCR 结束键。

9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。

10、按“Hist”，可查看上次扩增的历史记录。11、完全退出后，按台面左下方电源开关，拔出插销，切断电源。

八、PCR仪工作原理？

简单的说，就是通过高温变性，退火复性，延伸复制三个部分。

双链DNA在一定的环境中，通过在90-95℃变性，形成单链，然后退火降温到40-60℃，

在引物及其他辅助因子的作用下，使其初步结合，再快速升温至70-75℃，在相关酶的催化作用下，合成双链。完成一个扩增循环。

由此我们也可以得出PCR仪的一个主要参数：温度，温度示值是否准确，升温速率的快慢是影响其的一个主要因素。

具体要加什么缓冲液，要加什么引物，以及其他一些辅助因子，后续我们再去了解。

九、梯度pcr仪与普通pcr仪有什么区别？

原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。

反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析，普通pcr必须电泳。

结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通pcr无法实现的。

如果还不清楚建议去丁香园等网站逛逛，希望可以帮到你

十、pcr仪中pcr管怎样正确放置？

1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。 2、放 PCR 离心管，先把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR 管 放入前应加好反应体系各组分，再放入 PCR 离心管。 3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。 4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。 5、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要 的温度、时间、循环数等。 6、据 PCR 离心管中加入的反应体积总量，在“Reaction volume”后输入 相应数值，有 Std“1～100ul”和 9600“1~50ul”两档可供选择。 7、按 F1“Start”启动 8、按“INFO”对应键查看 PCR 结束键。 9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。 10、按“Hist”，可查看上次扩增的历史记录。11、完全退出后，按台面左下方电源开关，拔出插销，切断电源。